定义：
动物细胞融合是指两个或者多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞 ，称为杂交瘤细胞。
动物细胞融合通常有物理法（电刺激）、化学法（聚乙二醇）、生物法（灭活病毒）三种方法。
而杂交瘤细胞是由经免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合而成的 ，既有无限增殖能力又能产生特定抗体能力的细胞。
实验材料：
DMEM高糖培养基
FBS/NBS
生物安全柜
灭菌手术剪刀、镊子
HAT或HT选择培养基
CO2细胞培养箱
双抗（青链霉素混合液）
低速离心机
15mL、50mL无菌离心管
96孔细胞培养板
100mm细胞培养皿
单通道移液枪、多通道移液枪
200μL、1000μL吸头
倒置相差显微镜
220目（70μm）细胞筛
5mL一次性无菌注射器
实验准备：
饲养细胞：
融合前一天 ，取符合免疫质控标准的Balb/c小鼠 ，脱颈处死并泡在75%酒精中消毒。
用手术剪刀轻轻剪开老鼠的腹部皮肤。（注意请勿破坏小鼠的腹膜）
取10mL DMEM培养基在50mL无菌离心管中 ， 5mL注射器吸取3~5mL培养基 ，用手术镊子提起小鼠腹膜 ，将5ml培养基打入老鼠腹部 ，反复吹打3-4次后将培养基回收 ，置于50ml无菌离心管中。再次吸取5ml培养基 ，重复此步骤。
在无菌条件下取出小鼠脾脏 ，用研磨器研磨脾脏 ，与DMEM混合过筛网制成单个脾细胞悬液 ，再与腹腔细胞悬液混合 ，低速离心（1000rpm*10min） ，弃上清。
使用HAT培养基重悬 ，制成饲养细胞悬液 ，可按照105/孔使用 ，均匀铺96孔板 ，每孔100μL。（在制备过程中严格保证无菌）
SP2/0准备：
SP2/0细胞在融合前4—5天复苏 ，培养换液 ，使细胞在融合前状态良好且处于对数增长期。
试剂准备：
取1mL/管50% PEG1450一支 ，DMEM ，FBS-DMEM ，FBS-DMEM(HAT)等试剂 ，均预热置37℃
实验流程：
SP2/0收集：
SP2/0低速离心（1000rpm*5min） ，弃上清 ，用DMEM复悬清洗 ，再重复一次此步骤 ，37℃复悬备用。
脾细胞悬液制备：
取免疫完成的小鼠 ，眼球取血后 ，浸润在75%的酒精中消毒灭菌。在无菌条件下取出其脾脏 ，使用研磨器研磨脾脏 ，与DMEM混合过筛网制成单个脾细胞悬液 ，低速离心（1000rpm*10min） ，弃上清 ，用DMEM清洗并再一次重复此步骤 ，37℃复悬备用。
细胞融合：
将脾细胞和SP2/0按照[脾细胞：SP2/0 = 2:1~3:1]的比例 ，混合于50ml离心管中低速离心（1000rpm*10min） ，弃上清且确保管内无液体残留 ，将细胞团块轻轻敲散 ，使脾细胞
& SP2/0在管底均匀混合铺开。加入预热完成的50% PEG1450 ，在1min内逐滴均匀加入 ，加完后37℃反应1min ，反应完成后加入10~15ml左右终止液（DMEM）终止反应 ，由慢至快逐步滴加 ，10min全部加入完成。
融合铺板：
细胞融合完成后 ，低速离心（1000rpm*10min） ，弃上清 ，使用FBS-DMEM(HAT)复悬细胞制成细胞悬液 ，（过程中注意动作轻柔 ，不可用力吹打 ，以免破坏融合细胞降低融合率）。将提前一天已加入饲养细胞的细胞培养板取出 ，用吸头将板内培养基上清全部吸出丢弃 ，将刚制备完成的细胞悬液加入96孔培养板中 ，每孔200μL ，转入5% CO2恒温培养箱中培养观察。
融合换液：
融合细胞在FBS-DMEM(HAT)中培养3~7天 ，根据细胞融合情况 ，将培养上清吸出丢弃 ，更换成FBS-DMEM(HT) ，每孔200μL；灰汉蠊鄄煜赴翁 ，根据细胞生长情况 ，在4~7天后用Elisa进行融合阳性筛选检测。
使用到的NEST产品：
15mL、50mL无菌离心管
96孔细胞培养板
100mm细胞培养皿
220目（70μm）细胞筛
200μL、1000μL吸头
